(1)適當的厚度。這種厚度可以在更好的光學系統中實現高的分辨率，并且與系統的景深兼容。

 

(2)足夠透明。

 

(3)能夠在吸收差異的基礎上形成足夠的對比度。

 

幾乎所有的生物材料都可以通過石蠟包埋、切片(或涂抹)、粘貼、石蠟溶解、透明等工藝獲得，以滿足標本厚度和透明度的要求，然后通過染色程序獲得一定程度的對比度。

 

奧林巴斯透射光學顯微鏡常用的生物和醫學組織切片，通常厚3-7微米。在該厚度范圍內，當用低功率物鏡(例如，10x)觀察時，景深完全足以觀察整個切片厚度；當用高倍率物鏡(例如100倍)觀察時，景深僅為切片厚度的一小部分。從上到下不斷的微調可以給人一個切片的整體印象。因此，具有5^-7um厚度的常規截面可以被認為是低放大率和高放大率理想之間的折衷，這兩者都允許更好的景深和分辨率。同時，由于各種原因，這種諧波厚度在實際工作中也符合很多要求。，物體的精細結構并不總是**的；其次，在非常薄(1-V25m)的切片中，生物標本的三維關系不可見。相反，當使用8至10um或更大厚度的切片時，除了分辨率的可辨別損失之外，在生物樣品的不同水平上存在互惠互利。

 

在固定、包埋、切片、石蠟溶解和透明后，動物和植物材料的標本足夠薄和透明

 

但是對比度很小，對比度主要是因為折射和衍射。很明顯，相比之下，這個標本遠非理想。但這通過減少折射效應用“吸收劑”覆蓋了它，并通過吸收的差異增加了對比度。通過將標本包裹在加拿大樹膠或其他合成包裹介質中，可以減少標本和周圍區域之間的折射。當所有這些封裝的介質通過蒸發或聚合而硬化時，它們的折射率接近于固定的或脫水的植物和動物組織的主要成分的折射率。在大多數動物和植物組織中，該值介于1.51和1.54之間。這種方法也可以消除蓋玻片下反射造成的閃光。

 

一個多世紀以來，有效的方法是染色，這種方法與奧林巴斯顯微鏡標本形成了很好的對比。一般來說，未染色的生物樣本，尤其是當放置在折射率與生物樣本相似的介質中時，圖像中的對比度很小。在染色樣品中，對比度的增加是基于染料的選擇性分布。染色標本和未染色標本的對比有很大差異。

 

生物切片通常粘貼在標準尺寸為26×76毫米、厚度為1.1^-1.3mm.的載玻片上。載玻片的兩側應該是平行的平面。對玻璃載體厚度的要求不是很嚴格，但是當厚度超過一些高度校正的聚光器的自由工作距離時，載玻片厚度對于聚焦光源和在物平面中形成視場孔徑變得很重要。在這種情況下，厚度為0.9^-1.0mm的載玻片是合適的。

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